吴军林1，2，3，万艳娟1，3，吴清平2 *
1．广东环凯微生物科技有限公司（广州510663）；2．广东省微生物研究所（广州510070）；
3广州爱及恩生物保健食品有限公司（广州510070）
摘要辅酶Q10广泛存在于生物体内与线粒体内膜相结合的脂溶性醌类物质。是人体细胞能量制造的基础，具有效果明确的代谢性强心作用。因辅酶Q10极不易溶于水，见光易分解，对制备的辅酶Q10软胶囊内容物的稳定性进行了研究。以内容物沉降体积比为考察指标，研究了助悬剂对其影响，并考察其在冷藏、室温、高温高湿、避光及自然光条件下的稳定性，同时研究了抗氧化剂维生素E对辅酶Q10内容物稳定性的影响。发现辅酶Q10软胶囊内容物中添加维生素E对保持辅酶Q10含量有显著的作用，自然光条件下内容物中辅酶Q10含量下降明显，应通过避光的贮存条件来保证稳定性。
关键词辅酶Q10;软胶囊；内容物
辅酶Q10又称癸烯醌、泛醌，广泛存在于生物体内与线粒体内膜相结合的脂溶性醌类物质。不同来源的辅酶Q其侧链异戊烯单位的数目不同，人类及哺乳动物体内的辅酶Q是10个异戊烯单位，故称为辅酶010。在细胞线粒体呼吸链中，辅酶Q10接受黄素蛋白和铁硫蛋白复合物传递来的氢而被还原成氢醌型，该还原体可再将电子传递给细胞色素系统，将质子留在环境中，而本身又被氧化成醌型，因此，辅酶010是人体细胞能量制造的基础，具有代谢性强心作用，效果明确。目前，辅酶Q10主要用于急慢性病毒性肝炎、急性肝坏死的治疗，对心血管疾病和高血压有非常好的疗效，还可用于癌症的综合治疗，因具有抗氧化、抗应激和自由基清除功能，在保健食品中用于抗衰老、抗疲劳、减肥及美容等方面具有显著的功效。
辅酶Q10作为细胞自身产生的天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂，在生命活动中起到重要的作用。现代医学研究的结果已揭示了人体内的多种疾病与辅酶Q10的缺乏有关。人体缺乏辅酶Q10通常会疲倦无力而发生各种疾病，如心力衰竭、心律失常、中风、加速老化、高血压、糖尿病、心脏病发作、动脉硬化、肌肉萎缩等，用辅酶Q10能成功地预防这些疾病。目前辅酶Q10已开发出了多种保健食品，以软胶囊等剂型居多，因辅酶Q10极不溶于水，见光易分解，当前上市的辅酶Q10软胶囊剂型稳定性较差，辅酶Q10极易析出，品质有待于进一步提高。制备了辅酶Q10软胶囊内容物，初步研究了其稳定性，为辅酶Q10软胶囊产品的后续开发奠定了基础。
1 材料与方法
1.1仪器与设备
LC-20AT高效液相色谱仪：日本岛津公司；TM系列胶体磨：天津市鑫普机械制造有限公司；Teflon电动匀浆器：B.Braun公司；DU7400分光光度计：Beckman公司。
1.2试剂
辅酶Q10（经HPLC检验纯度在99.0%以上）：内蒙古金达威药业有限公司；蜂蜡：广州大地化工有限公司；亚麻籽油：新疆优康来生物科技开发有限公司；天然维生素E：浙江新昌医药股份有限公司；辅酶Q10、维生素E标准品：中国药品生物制品检定所；其余化学试剂均为国产分析纯：广东环凯微生物科技有限公司。
1.3试验方法
1.3.1辅酶Q10及维生素E含量的测定
采用高效液相色谱法测定辅酶Q10及维生素E的含量，辅酶Q10依据国家标准CB/T 22252-2008“保健食品中辅酶Q10的测定”规定的方法进行测定；维生素E依据国家标准GB 5413.9-2010“食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定”规定的方法进行测定。
1.3.1.1色谱条件
高效液相色谱仪（配紫外检测器）。辅酶Q10检测色谱条件为：色谱柱，ODS C18柱(4.6 mm×150mm，5μm)；测定波长280 nm;柱温25℃；流动相，乙腈-四氢呋喃-水( 55+40+5)；进样量10 VL;流动相流速1.0 m L/min。维生素E检测色谱条件为：色谱柱，C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；测定波长294 nm;柱温，35℃±l℃；流动相，甲醇；进样量20 μL；流动相流速1 m L/min。
1.3.1.2标准溶液配制
1.3.1.2.1辅酶Q10标准储备液(2.00 mg/m L)
准确称取辅酶Q10标准品0.1 g(精确到0.0001g)，置于50 m L棕色容量瓶中，加正己烷溶解并定容至刻度。
1.3.1.2.2辅酶Q10标准使用液（200 μg/m L）
准确吸取1.00 m L辅酶Q10标准储备液于10 m L棕色容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度。
1.3.1.2.3辅酶Q10标准曲线的绘制
分别吸取标准使用液，用正己烷一无水乙醇(1+9)的混合溶剂稀释并在棕色容量瓶中定容的浓度分别为4.0，10，20，40和50μg/m L标准系列。1.3.1.2.4维生素E标准储备液（a-生育酚）(500μg/m L)
精确称取50 mg的维生素E标准品，用无水乙醇溶解并定容于100 m L棕色容量瓶中。
1.3.1.2.5维生素E标准曲线的绘制
分别准确吸取维生素E标准储备液1.00，2.00．3.00，4.00和5.00 m L于50 m L棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混匀。此标准系列工作液浓度分别为10.0，20.0,30.0,40.0釉50.0μg/m L.
1.3.1.3样品溶液配制
1.3.1.3.1检测辅酶Q10含量样品溶液的配制
精密称取软胶囊均匀内容物约0.5 g(精确到0.001 g)，置于100 m L棕色量瓶中，加正己烷80 m L，超声提取20 min后，加正己烷至刻度，摇匀，量取1m L上述溶液于20 m L．用无水乙醇稀释至刻度，混匀，过0.45 μm滤膜，滤液备用。
1.3.1.3.2检测维生素E含量样品溶液的配制
精密称取软胶囊均匀内容物约0.13 g(精确到0.1mg)于250 m L三角瓶中。
1)皂化
向样品中加入约100 m L维生素C的乙醇溶液，充分混匀后加25 m L氢氧化钾水溶液混匀，放入磁力搅拌棒，充氮排出空气，盖上胶塞。1 000 m L的烧杯中加入约300 m L的水，将烧杯放在恒温磁力搅拌器上，当水温控制在53℃±2℃时，将三角瓶放入烧杯中，磁力搅拌皂化约45 min后，取出立刻冷却到室温。
2)提取
用少量的水将皂化液全部转入500 m L分液漏斗中，加入100 m L石油醚，轻轻摇动，排气后盖好瓶塞，室温下振荡约10 min后静置分层，将水相转入另-500 m L分液漏斗中，按上述方法进行第二次萃取。合并醚液，用水洗至近中性。醚液通过无水硫酸钠过滤脱水，滤液收入500 m L圆底烧瓶中，于旋转蒸发器上在40℃+2 ℃充氮条件下蒸至近干（绝不允许蒸干）。残渣用石油醚转移至20 m L容量瓶中，定容。
从上述容量瓶中准确移取1.0 m L石油醚溶液放人试管中，将试管置于40℃±2℃的氮吹仪中，将试管中的石油醚吹干。向试管中加10 m L甲醇，振荡溶解残渣。再将试管以不低于5 000 r/min的速度离心10 min，取出静置至室温后待测。
1.3.2 内容物沉降体积比测定
内容物的物理稳定性是评价混悬剂软胶囊的重要指标，测定沉降体积比可用于比较混悬内容物的物理稳定性，评价助悬剂的效果。通过测定配方的沉降体积比筛选配方。测定方法为：将混合好的内容物倒人直径相同的10 m L具塞试管中，记下原始高度H。静置，每隔一段时间测量沉降物高度H，，计算沉降体积比。
K=H1/H (1)
比值越大，表示混悬剂越稳定。
1.3.3 内容物处方筛选
以辅酶Q10为原料，以精制亚麻籽油为基质，加入蜂蜡助悬剂保持内容物的均一稳定。蜂蜡为保健食品中混悬型软胶囊的常用助悬剂，试验初筛不同比例助悬剂加入量。步骤为：配方量蜂蜡，加人少量亚麻籽油，研磨使溶解，加入配方量剩余的蜂蜡和大豆油，水浴80℃加热使熔化，放冷，加入辅酶Q10，研磨混匀。将各配方的内容物分别置于10 m L具-塞试管中，分别置于室温( 20℃～25 ℃)和高温高湿（温度40℃+2℃，相对湿度75%±5%）中考察内容物沉降体积比。
2结果与分析
2.1助悬剂对稳定性的影响
由表1和表2结果可以看出，随着蜂蜡比例的增加内容物的物理稳定性也增加，蜂蜡加入量到3.0%，室温放置7d未沉降，可满足轧制软胶囊的生产工艺需要，但放置14 d已出现沉降，会使成品在不恰当的贮存运输期间出现分层现象，影响外观，增大试验用量到5.0%，室温放置内容物出现凝固现象，不分层，物理稳定性较好。低温放置，蜂蜡加入量到3.0%均凝固，不分层，均出现辅酶Q10析出现象，高温放置均不出现分层，溶液黄色透亮。
2.2抗氧剂对稳定性的影响
添加维生素E能提高辅酶Q10含量的稳定性。试验在内容物中加入维生素E等抗氧剂，混匀后放入试管中自然光照及密闭条件下，高温高湿放置3个月测定辅酶Q10含量，结果见表3和4。
配方8中辅酶Q10含量降低的最快，说明辅酶Q10配方中需要添加维生素E，维生素E对Q10有保护作用，能提高本品的稳定性。4℃和37 0C的辅酶Q10含量较室温下辅酶Q10含量低，因此内容物需要在阴凉处保存。维生素E含量在低温、常温及高温高湿条件下稳定。
2.3光照对稳定性的影响
由于辅酶Q10为黄色或淡黄色、无臭无味的结晶状粉末，易溶于氯仿、苯、四氯化碳，溶于丙酮、石油醚和乙醚；微溶于乙醇，不溶于水和甲醇；对温度和湿度稳定，但遇光易分解成红色物质。试验将各配方的内容物分别置于10 m L具塞试管中，分别置于室温( 200C～25 0C)避光和不避光条件下中考察内容物中辅酶Q10含量，结果见表5，并考察维生素E含量，结果见表6。
不避光室温条件下辅酶Q10损失较避光室温下损失多，说明辅酶Q10内容物需避光保存；维生素E含量总体变化不明显。
3结论与讨论
辅酶Q10越来越受到国际市场的关注，被广泛用于营养补充、化妆品、食品等方面。目前，在全球辅酶Q10市场上，日本和美国大约占据了85%的份额。在美国，辅酶Q10除了应用在医药领域外，还作为一种维生素用于食品添加剂，作为一种非处方药和功能性食品在超市、食品连锁店和药店自由出售。欧洲地区也是辅酶Q10的重要消费市场，其主要用途同样是保健食品生产。日本是世界上较早研究、推广辅酶Q10的国家，日本的辅酶Q10提纯技术处于世界领先地位，而且辅酶010已经普遍应用于药品、食品、化妆品领域。目前，世界市场对辅酶Q10原料的年需求量已经达到400 t左右并且仍在以每年10%的速度增长。我国辅酶010的年消量在30吨左右。我国对辅酶Q10的研究应用起步较晚，国内辅酶Q10的应用主要在医药行业，我国辅酶Q10按药品管理，受限很大，根据国情，并结合欧美日本的作法，也将辅酶Q10开发成各种营养保健食品，具有必要性和紧迫性。
辅酶Q10制成软胶囊易于服用，生物利用度高，外观美观，可满足市场对产品不同剂型的需求。但辅酶Q10见光易分解，根据试验结果应通过适当的贮存条件来保证软胶囊成品的稳定性。辅酶010软胶囊内容物中添加维生素E对保持辅酶Q10含量有显著的作用，且维生素E在内容物体系中也保持相对稳定，辅酶Q和天然维生素E在制剂过程中不会发生变化，与孙艳妮等研究一致。因此，在开发辅酶Q10保健食品配方中需要添加维生素E，即利于产品的稳定，且有助于辅酶010与维生素E的协同抗氧化作用。
