何首乌保健酒制备工艺

陈泠伶1，李荣1，李维2，石一丁3，杨文字1，陈祥贵1*

 1．西华大学生物工程学院(成都610039)；2．四川旅游学院食品科学系(成都610039)；

 3四川省川源药业有限公司(眉山620000)

摘要保健酒配方为：何首乌、黄芪、大枣、枸杞、茯苓、熟地、黄精、三七。以二苯乙烯苷和总皂苷的含量为评价指标研究具有较强抗氧化、抗衰老何首乌保健酒的制备工艺。从浸泡法、渗漉法、回流法三种方法中选择最佳提取工艺，并进行提取工艺正交优化。从活性炭吸附法、冷冻法、微孔膜法三种方法中选择除浊工艺，并进行除浊工艺正交优化。结果表明，浸泡法为最佳提取工艺，料液比为1：10 (g/m L)，浸泡次数为3次，浸泡时间为12 h，浸

泡基酒度数为65%vol;冷冻法为最佳除浊方法，冷冻温度-5。C,冷冻时间9h，冷冻次数为1次；成品二苯乙烯苷含、总皂苷、总蒽醌和多糖含量分别为46.39，68.1，3.14和3 g/100mL。该配方的保健酒具有很好的保健功效。

关键词保健酒；提取工艺；除浊工艺

  随着人口老龄化程度的加快，人类亚健康及慢性病人群的上升，对于具有天然、健康、营养保健食品的需求也日益增加。保健食品是食品行业的全新内容，它满足了我国广大消费者对营养、预防疾病和提高生理状态的需要，具有相应的保健功能，成为我国食品市场的新血液。其中，开发抗氧化、抗衰老、增强免疫力的保健酒成为保健食品研究的热点，消费者对保健酒的喜爱已超过了白酒，保健酒已经成为了一种新的消费热潮。保健酒的功能来源于中

草药。保健酒的拟定配方为：制何首乌、黄芪、大枣、枸杞、茯苓、熟地、黄精和三七。何首乌保健成分主要是二苯乙烯苷和蒽醌类物质，黄芪和大枣保健成分主要是皂苷和抗氧化的多糖类，枸杞、茯苓、熟地和黄精的保健成分主要是多糖，三七保健成分主要是皂苷类。二苯乙烯苷具有抗氧化和抗衰老的功效，皂苷具有提高免疫能力的功效，多糖具有抗氧化的功效，少量的蒽醌具有通便作用，可治疗便秘。二苯乙烯苷及皂苷类成分易溶于酒精，多糖类成分能溶于水和低浓度的酒精。何首乌有延缓衰老和增强免疫的能力、抗菌消炎、保护肝脏、促进肠的蠕动等药理作用。保健酒的度数不能超过38%vol，综合二苯乙烯苷及皂苷类成分的溶解性，兼顾多糖类成分的溶出，拟定何首乌酒的酒精度为32%vol。拟通过比较浸泡法、渗漉法和回流法三种提取方法，以2，3，5，4’一四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、总皂苷和干浸膏率为指标，初步选定何首乌酒的提取方法，然后用单因素试验，考察基酒浓度、料液比、提取时间和提取次数，初步优化提取工艺参数，再用正交试验对上述提取工艺参数作进一步优化，从而确定何首乌酒的提取工艺方案。

1  材料与方法

1.1材料

 制何首乌、黄芪、大枣、枸杞、茯苓、三七、熟地、黄精：成都中药饮片厂；甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）：美国TEDIA天地试剂公司；Amberlite-XAD-2大孔树脂：美国Sigma公司；没食子酸对照品(纯度≥98%)：四川省药品检验所。

 人参皂苷对照品、二苯乙烯昔对照品、大黄素甲醚对照品：中国药品生物制品检定所；其余均是国产分析纯。

1.2仪器与设备

 LC-20AB-高效液相色谱仪(配紫外检测器SPD-M20A)：日本岛津公司；R-210型旋转蒸发器：瑞士BUCHI公司；微型离心机：Eppendorf公司；KQ-100DE型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；紫外可见分光光度计( UV 7558)：上海精密仪器有限公司；恒温水浴锅（GSr-2）：北京医疗设备厂。

1.3方法

1.3.1何首乌保健酒二苯乙烯苷和蒽醌含量的检测

 何首乌中主要活性成分为二苯乙烯苷和蒽醌类物质，在药典2010版中，规定何首乌中2，3，5，4’-四羟基反式二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量不低于1.0%，以结合蒽醌以大黄素( CisHioOs)和大黄素甲醚( C16H1205)的总量计，不得少于0.10%。

 结合蒽醌含量=总蒽醌含量( mg/100 m L) -游离蒽醌含量( mg/100 m L) (1)

 二苯乙烯苷和蒽醌含量的检测方法采用高效液相色谱法测定，参考药典2010年版一部（药材部分）。样品检测前先通过中性氧化铝的吸附，再用0.045 μm微膜过滤。

1.3.2何首乌保健酒总皂苷含量的检测

  样品中总皂苷经提取、PT-大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560 nm处比色测定。

 总皂苷含量的检测方法采用分光光度法测定，参考保健食品检验与评价技术规范（2003版）。

1.3.3何首乌保健酒多糖含量的检测

 多糖的检测方法采用硫酸苯酚法测定，参考保健食品检验与评价技术规范（2003版）。

1.3.4何首乌保健酒制备流程

1.3.4.1  何首乌保健酒配方的原料及用量

 制首乌3g、黄芪3g、大枣2g、枸杞2g、茯苓2g、三七0.5 g、熟地0.5 g、黄精0.5 g，拟制成32%vol保健酒100 m L。

1.3.4.2何首乌保健酒制备流程

  药材→提取→减压浓缩→调酒精度数为32%vol→除浊→成品

1.3.4.3  吸液率的计算

 按原配方比例称原料药材，加100 m L浸泡至透心，过滤，量取滤液体积为68 m L通过计算得吸液率为150%。

1.3.5提取方法

1.3.5.1浸泡法

 取原配方的两倍量，料液比为1：10( g/m L)，按吸液率加入495 m L 50%vol基酒，浸泡3次，每次浸泡12 h，分别收集三次浸泡的滤液在50 ℃ 0.08 M Pa下减压浓缩。将浓缩液配制成32%vol的保健酒。取10m L离心，取上清液按照上述方法分别检测二苯乙烯苷、总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.3.5.2渗漉法

 取原配方的两倍量，按吸液率加入495 m L 50%vol基酒，浸泡12 h后，以1 m L/min的流速放液，直到流出液颜色很淡为止，收集渗漉提取液在50℃0.08 M Pa下减压浓缩。将浓缩液配制成32%vol的保健酒。取10mL离心，取上清液按照上述方法分别检测二苯乙烯苷和总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.3.5.3  回流法

 取原配方的两倍量，料液比为1：10( g/m L)，按吸液率加入495 m L 50%vol基酒，在87℃水浴下回流三次。冷却过滤，收集回流提取液在50℃0.08 M Pa下减压浓缩。将浓缩液配制成32%vol的保健酒。取10mL离心，取上清液按照上述方法分别检测二苯乙烯

苷、总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱

中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.3.6何首乌保健酒的除浊方法

1.3.6.1活性炭吸附法

 取原配方量，按最佳提取工艺制备32%vol何首乌保健酒。按照2%的比例加入活性炭JT 203，静置吸附12 h，用孔径为30～50μm 滤纸过滤。按照上述方法分别检测二苯乙烯苷、总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.3.6.2冷冻法

 取原配方量，按最佳提取工艺制备32%vol何首乌保健酒。在-20℃下冷冻12 h，低温过滤。按照上述方法分别检测二苯乙烯苷和总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.3.6.3微孔膜过滤法

 取原配方量，按最佳提取工艺制备32%vol何首乌保健酒。用0.45μm 孔径的醋酸纤维素膜过滤1 m L。按照上述方法分别检测二苯乙烯苷和总皂苷含量。取10 m L于蒸发皿中，在60℃烘箱，中烘干至恒重，计算干浸膏得率。

1.4正交试验的设计

1.4.1提取方法的正交优化试验

1.4.1.1料液比的筛选

  不同料液比浸泡后的二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率的变化如图1所示，不同料液比下各指标成分含量差异明显，在4～6倍时，各指标成分含量逐渐增加，10倍时，各成分含量基本达到最大值。可见，要获得较好的提取效果至少需要1：6( g/m L)的料液比。因此，用料液比1：6～1：10( g/m L)来浸泡配方中药材，可以使药材中有效物质充分地提取出来。所以，选取料液比1：6～1：10( g/m L)来进行浸泡法提取工艺的正交试验。

1.4.1.2浸泡时间的筛选

  不同浸泡时间处理后的二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率如图2所示，浸泡时间在12 h以下时，各指标成分含量随浸泡时间的延长面明显增加，在36 h时基本达到最大值。可见，要获得较好的提取效果至少需要浸泡12 h；浸泡12～36 h，可以使药材中有效成分较大限度地提取出来。所以，采用浸泡时间在12～36 h来进行浸泡法提取工艺的正交试验。

1.4.1.3浸泡次数的筛选

  不同浸泡次数后的二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率的变化如图3所示，浸泡次数在1～3次时，随着浸泡次数的增加，各指标成分的含量逐渐升高，浸泡次数超过3次后，曲线的变化趋于平缓，在浸泡5次后，各指标成分含量基本达到最大值。考虑到随着浸泡次数增加到3次以上后，各指标成分含量的变化不大，而人力、物力的成本却大大增加，不利于生产规模化。因此，选取生产企业常用的浸泡次数范围在1～3次进行浸泡法提取工艺的正交试验。

1.4.1.4基酒度数的筛选

 由图4可以看出二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率的含量随基酒度数的变化趋势是：总皂苷和二苯乙烯苷的含量随基酒度数的升高而增加，但在基酒度数30%vol以上时曲线的变化趋于平缓，在基酒度数在65%vol时趋于稳定；随着基酒度数的升高，干浸膏率的变化不大。可见，要获得较好的提取效果至少应使基酒度数达到30%vol以上；因此，用30%～65%vol的基酒浸泡配方中的药材，可以使药材中的有效成分较大限度的提取出来。所以，可以选取基酒度数范围在30%～65%vol进行浸泡法提取工艺的正交试验。

 对料液比、提取次数、提取时间和溶剂度数因素进行考察，按L9(34)正交表进行试验，以二苯乙烯苷、总皂苷含量和干浸膏率作为考察指标，优化提取方法的最佳影响因素，因素水平见表1。

1.4.2除浊方法的正交优化试验

 对冷冻时间、冷冻温度和冷冻次数因素进行考察，按L9(33)正交表进行试验，以二苯乙烯苷、总皂苷含量和干浸膏率作为考察指标，优化除浊方法的最佳影响因素，因素水平见表2。

2结果与分析

2.1提取方法的选择

 比较表3中三种提取方法中二苯乙烯苷、总皂苷含量和干浸膏得率可看出，浸泡法提取液中的总皂苷和二苯乙烯苷含量均高于其他两种方法，干浸膏率回流法较高。总皂苷和二苯乙烯苷是本产品主要保健功能和功效成分指标，也是何首乌保健酒功用的基础，而且浸泡法相对其他两种提取方法来说，操作简单，生产成本较低，所以试验选择浸泡法作为何首乌保健酒的提取方法。

22浸泡法正交优化试验结果

 根据提取方法选择的结果，以浸泡法为提取工艺，进行L9(34)正交试验，优化浸泡法的最佳提取条件。正交优化结果见表4。

 比较表4中，4个因素JR值的大小，对总皂苷的影响主次因素为：B>D>A>C；对二苯乙烯苷的影响主次因素为：B>D>A>C；对干浸膏率影响主次因素为：B>A>D>C，提取次数为最主要影响因素。综合数据显示和生产效率，选择最佳影响因素为：A3B3C1D3，即料液比为1：10( g/m L)，提取次数为3 次，提取时间为12 h，溶剂度数为65%vol。

2.3除浊方法的选择

 比较表5中三种除浊方法中二苯乙烯苷、总皂苷含量和干浸膏得率可看出，微孔膜法和冷冻法中二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏含量均高于活性炭吸附法，且感官评分较高。但是微孔膜使用成本高，且不适用于大规模生产，所以试验选用冷冻法为何首乌保健酒除浊工艺。

2.4冷冻法正交优化试验结果

2.4.1冷冻出浊温度的筛选

  不同冷冻温度除浊后的二苯乙烯苷、总皂苷和干净膏率如图5所示，各指标成分的含量均随着温度的降低而有下降的趋势，因此，采用冷冻除浊工艺，在除去一些杂质的同时，损失少量二苯乙烯苷、总皂苷等指标成分也是不可避免的。当冷冻温度在-5℃以下时，总皂苷和二苯乙烯苷曲线的变化趋于平缓，而干浸膏率则一直呈下降趋势；各指标成分的含量在-20℃基本趋于稳定，说明在-20℃时保健酒中的杂质已经基本除尽。因此，冷冻温度在-5℃～-20

℃，可以去除何首乌保健酒中大部分的杂质和沉淀，同时可以使总皂苷和二苯乙烯苷的含量损失较少。所以，选取冷冻温度在-5℃～-20℃进行冷冻过滤法除浊工艺的正交试验。

2.4.2冷冻除浊时间的筛选

  不同冷冻时间除浊后的二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率如图6所示，各指标成分的含量均随着冷冻时间的延长而有下降的趋势，因此，在除去一些杂质的同时，损失少量二苯乙烯苷、总皂苷等指标成分也是不可避免的。当冷冻时间在6～12 h时，二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率曲线的变化基本趋于平缓。因此，冷冻除浊时间在6～12 h，可以去除何首乌保健酒的大部分杂质和沉淀，同时各指标成分的含量相对损失较少。所以，选取冷冻时间在6～12 h进行冷冻过滤法除浊工艺的正交试验。

2.4.3冷冻除浊次数的筛选

 不同冷冻除浊次数除浊后的二苯乙烯苷、总皂苷和干浸膏率如图7所示，在冷冻除浊次数在3次以上时，随着冷冻除浊次数的增加，各指标成分的含量的变化均趋于平稳。所以，选取生产企业常用的冷冻除浊次数范围在1～3次进行冷冻过滤法除浊工艺的正交试验。

 根据除浊方法选择的结果，以冷冻法为除浊工艺，进行L9(33)正交试验，优化冷冻法的最佳除浊条件。正交优化结果见表6。

 比较表6中3个因素值的大小，每个指标都有不同的主要影响因素。综合数据显示和生产效率，选择最佳影响因素为A2B1C1，即冷冻时间为12 h，冷冻温度为-5℃，冷冻次数为1次。 

成品二苯乙烯苷、总皂苷、总蒽醌以及多糖含量见表7。

3结论

 试验配方以何首乌为主，以其他成分为辅，优化了保健酒的功效，增强了酒的保健功能。选择浸泡法为提取方法，浸泡最佳条件：料液比为1：10(g／m L)，浸泡次数为3次，浸泡时间为12 h，浸泡基酒度数为65%vol。选择冷冻法为除浊方法，冷冻最佳条件：冷冻温度-5℃，冷冻时间9h，冷冻次数为1次。结果表明，按照工艺制备的何首乌保健酒具有较高的二苯乙烯苷、皂苷和多糖含量，含有少量的蒽醌，具有较强的保健功能，达到了何首乌保健酒工艺设计预期目的。