作者：郑晓敏
食品微生物检测目前仍主要依赖传统的培养、分离及生化鉴定法，耗时费力，缺乏时效性及简便性，难以满足对食品行业工业化流水作业进行实时监控并及时排除隐患的需求。微生物测试纸片正是应快速检测的市场需求而生的一款集高效、简便、精确、灵敏等优势为一体的新兴检测产品。通过将特定的培养基及显色基质附着于纸片、胶片及纸膜等载体上，纸
片法省去了传统方法中培养基配制、平板制备等繁琐的程序，其特异的颜色反应也有效克服了普通培养基上菌落形态特征不明晰等缺陷，是现代食品微生物检测的理想之选。
目前国内市场用的微生物快速检测纸片多为美国3M、日本NISSUI等进口品牌，价格昂贵。近年来，随着国家对食品安全检测的日益重视，国内许多生物科技公司也开始陆续开发相关的干片产品，其价格优势显著，为检测机构及相关食品企业提供了更多的选择。为了更好地为受众选择合适的检测产品提供一定的借鉴和参考，试验比较了国产和进口两个代表性测试干片产品与传统培养法在菌落总数及大肠菌群计数中的表现，包括计数结果、成本、简易性、菌落辨识度等性能。
1 材料与方法
1.1试验仪器与设备
一次性移液管：JET BIOFIL；电动移液器：Jen-cons；一次性塑料培养皿：JET BIOFIL；锥形瓶：四川蜀玻；灭菌试管：上海五一；拍击式样品均质器BagMixer:法国Interscience；高压蒸汽灭菌锅：日本Hirayama；隔水式恒温培养箱：上海精宏。
1.2主要试剂
稀释液：磷酸盐缓冲液（北京陆桥）；复苏培养液：营养肉汤（北京陆桥）。
传统培养法所用培养基：平板计数琼脂、结晶紫中性红胆盐琼脂( VRBA)和煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤：均购自北京陆桥，根据产品说明配制、灭菌、使用。
快速测试纸片：菌落总数测试纸片和大肠菌群测试纸片（国产及进口品牌各一）。
1.3试验方法
分别选取日常检测中卫生指标菌（指菌落总数和大肠菌群）污染低、中、高的固、液食品各一份，以国标法和纸片法（2种）分别测定其菌落总数及大肠菌群，分析比较计数结果；同时，采用实验室保存的大肠埃希氏菌( CMCC 44113)作为验证试验的材料，加标于经灭菌处理的白馒头中作为检测对象，对三种检测方案的计数结果、菌落辨识度、简便性及检测成本等指标进行综合评价。
1.3.1菌株复苏
取保存于-80 0C的大肠埃希氏菌，接种于营养肉汤培养液中，于37℃静置培养至麦氏浊度1.5左右。
1.3.2模拟加标样本制备
取复苏后的原始菌液1 mL加入25 g白馒头中，作为模拟检样。
1.3.3菌落总数和大肠菌群测定
参照GB 4789.2_2010、GB 4789.3_2010（第二法）执行．即取检样25 g或25 mL加入225 mL磷酸盐缓冲液，充分拍击均质，取上清液1 mL，以磷酸盐缓冲液做10倍连续梯度稀释，取三个合适的稀释度，分别用纸片法和传统倾注平板计数法进行菌落总数和大肠菌群计数，于36℃恒温培养箱培养48 h（菌落总数）和24 h（大肠菌群），每组测试做三个平行重
复，比较三种检测方法的数据平行性，以统计学方法进行显著性分析。
2结果
2.1计数结果
如表l所示，传统培养法与两款纸片产品在供试实际及模拟样本的菌落总数和大肠菌群的计数结果上呈现高度平行性，方差分析结果显示两个卫生指标的各数值间均无统计学差异(p>0.05)。
2.2菌落辨识度
稀释样液加入传统培养基或纸片于36℃培养后，其菌落形态呈现一定的差异（图1）。其中平板计数琼脂上菌落呈白色菌落，边缘清晰，其中位于培养基表面的为中心白点外扩至直径约2 cm的圆形菌落，而位于培养基内层的菌落则呈小白点状；进口菌落总数测试纸片上的菌落呈边缘清晰可辨的红色圆形菌落，而国产纸片上的红色菌落则个体边缘模糊、不规则甚至拖尾。
大肠菌群在VRBA平板上呈紫红色且周围有红色胆盐沉淀环的圆形菌落，边缘清晰；进口纸片上的大肠菌群呈红色、带气泡状，清晰可辨；国产大肠菌群测试纸片上的菌落亦呈现类似于其在菌落总数快速测试干片上的形态，边缘模糊、拖尾。
2.3简便性
GB传统培养法需要经过培养基配制及灭菌等准备程序以及后期培养皿清洗等善后工作，相对于商品化的测试干片产品耗时费力；配制好的培养基最好尽快使用，其放置于4℃的保存的时间亦不宜过长，而本研究所涉两品牌测试纸片的有效期均长达1年之久，方便随时取用：此外，相对于进口大肠菌群测试片，国产纸片无法指示产气特性，需补充BGLB发酵以判定是否产气的确证试验，在一定程度上折损了其简易性。
2.4成本
就试验所涉的三组材料分别进行成本核算，结果显示（表2），进口纸片法检测一个样本的菌落总数和大肠菌群的成本分别约为85元和96元，为国产纸片法和传统培养法的2和7倍：而国产纸片检测成本则仅略高于GB法约3倍。但值得一提的是，采用纸片法时培养所需空间小，相对于平板培养法可大大节约空间成本。
3讨论
研究比较了快速测试纸片和传统培养法用于测定实际及模拟食品样本中菌落总数和大肠菌群的效果，综合评价了包括计数结果、菌落辨识度、操作简便性及检测成本在内的4个指标。以日常检测中卫生指标菌染菌数高、中、低的固、液体实际食品样本6份及模拟加标样品l份为检测对象，计数结果显示两种测试方法无统计学差异，高度吻合。干片法用于菌落总数和大肠菌群计数的可靠性业已在食品与空气沉降菌总数、餐具大肠菌群计数等多项研究中被广泛证实。另外，相对于传统培养法，干片法可省去繁杂的前期准备及后期清洁、废弃处理等程序，有效简化操作，并节约培养所需的空间。同时，进口纸片在菌落辨识度上显著优于传统方法和国产纸片，尤其适用于复杂基质样本的检测。但是，商品化干片测试产
品（尤其是进口产品）的检测成本也远高于传统培养法。
综上所述，用户可综合考虑成本、操作简易度及检验结果可读性及科学性等因素选择合适的检验方法，以获得最优信价比的高效检测。
4摘要
比较了国产及进口两个品牌的菌落总数及大肠菌群测试片与传统国标法计数结果的符合度，并对干片产品较之传统培养法的茵落特征辨识度、操作简便性及检测成本等关键指标进行对比评判。结果显示，三者在所测两种基本卫生指标的计数结果上呈现高度平行性p>0.05），快速纸片法可简化程序但成本高，使用者可根据实际工作需要结合使用；而在茵落辨识度上进口纸片呈现显著优势，尤其适用于复杂基质样本的检测。
