杨永晶1，2，索有瑞1，3，韩丽娟1，2，常珊4
1．中国科学院西北高原生物研究所（西宁810001）；2．中国科学院大学研究生院（北京100049）；3．青海大学农林科学院（西宁810001）；4．青海瑶池生物科技有限公司（海东810599）
摘要采用气相色谱技术分析了树莓果油的脂肪酸组成，并利用体外自由基清除试验评价了树莓果油的抗氧化活性。结果表明，树莓果油中主要含4种脂肪酸，其中饱和脂肪酸棕榈酸占脂肪酸总量的0.66%，3种不饱和脂肪酸油酸、亚油酸和a-亚麻酸分别占脂肪酸总量的17.33%, 49.00%和33.01%。抗氧化活性研究表明，树莓果油对ABTS自由基和DPPH自由基具有很强的清除能力，12 mg/m L的清除率分别高达96.49%和93.53%。此外，树莓果油对超氧阴离
子和羟自由基也有一定的清除作用，12 mg/m L的清除率分别为49.89%和37.73%。试验结果为树莓果油的进一步开发与利用提供了理论基础。
关键词 树莓果油；脂肪酸分析；抗氧化
树莓（Rubus idaeus L．）为蔷薇科悬钩子属植物，又名覆盆子、山莓、牛奶泡等，分布于北半球温带和寒带。近年来，随着广泛的人工培育、引种和种植，目前已有上百个树莓品种。树莓果实为小聚合果，味甜微酸，可直接食用，也可加工成果酱、果汁、果酒等诸多产品。树莓因其丰富的营养和良好的医疗保健作用，被誉为“黄金水果”。树莓果实中含有大量的维生素、矿质元素、蛋白质、氨基酸等营养物质，还含有多糖、有机酸、黄酮、花青素、多酚、挥发油、鞣质等多种生物活性成分。现代药理研究表明，树莓具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抗癌、抗疲劳等多种活性。
近年来，对于树莓果实的研究越来越多，主要包括树莓果实中花青素、黄酮、酚类、鞣花酸等化合物的分离纯化，结构确证及活性评价，树莓籽油的提取、分析及活性研究，树莓多糖的提取、分析及活性研究等，但仍鲜见到树莓果油的相关研究。鉴于此，试验采用气相色谱技术分析了树莓果油中的脂肪酸组成，并利用体外自由基清除试验评价了树莓果油的抗氧化活性，为树莓果油的进一步开发与利用提供了理论基础。
1 试验材料与仪器
1.1试验材料
树莓冷冻果（品种：秋英Autumn Britten）：购自青海瑶池生物科技有限公司。
1.2试剂
脂肪酸甲酯标准品：自北京北纳创联生物技术研究院；2，2-联氮-二（3-乙基一苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐( ABTS)、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基( DPPH)：上海晶纯生化科技股份有限公司；乙腈（色谱纯）：天津市百世化工有限公司；石油醚（沸程60 ℃～90℃）、无水乙醇、正己烷、硫酸亚铁、30%双氧水、水杨酸、邻苯三酚、过硫酸钾：分析纯，青海天顺化学试剂公司。
1.3试验仪器与设备
DHG-9203A电热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司；CLF-30B高速连续型超微粉碎机：浙江省温岭市创力药材器械厂；ALC-110.4电子天平：ACCULAB; SCQ-6201C超声清洗器：上海声彦超声波仪器有限公司；N-1200BT旋转蒸发仪：EYELA；TD-RS-1涡旋混合仪：北京同德创业科技有限公司；7890A气相色谱：Agilent Technology; UPT-I -5T超纯水机：成都超纯科技有限公司；DZKW-D-4恒温水浴锅：河南郑州南北仪器设备有限公司。
2试验方法
2.1树莓果油的提取
将树莓冷冻果置于电热恒温鼓风干燥箱中除去水分（温度55℃）。用超微粉碎机粉碎树莓干果（转速22 000 r/min，时间1～2 s）后过80目筛网(孔径0.2mm)，除去完好无损的树莓籽，即得到树莓果粉。称取树莓果粉30 g，置于三角锥形瓶中，加入石油醚，采用超声提取法提取树莓果油。提取条件如下：料液比1：30( g/m L)，超声功率200 W，提取时间90min，温度40℃，重复提取3次。合并树莓果油提取液，经旋转蒸发仪于45℃进行减压浓缩，除去溶剂后即得到树莓果油。
2.2树莓果油脂肪酸含量测定
2.2.1脂肪酸的甲酯化
量取树莓果油1mL，加入2 m L正己烷，1 m LKOH-甲醇混合液(2 mol/L)，充分振荡并混匀。将混合溶液于60℃水浴30 min。样品冷却后加水至10m L，充分振荡后于室温静置60 min。待分层后，取上清液进样。
2.2.2气相色谱条件
色谱柱HP-88（60 m×250 μm×0.2μm）；进样量1v,L。升温程序：初始温度40℃，持续3 min，以40C/min升至120℃，再以8。C/min升至160℃，持续1min;以3℃/min升至181℃，持续10 min；以2℃／mm升至212℃，持续5 min；共运行48.5 min。检测器为FID，汽化温度250℃，氢气流量40 m L/min，空气流量400 m L/min，尾吹流量19.5 m L／min。
2.3树莓果油抗氧化活性测定
2.3.1树莓果油ABTS自由基清除率的测定
3结果
3.1树莓果油脂肪酸组成分析
图1为脂肪酸甲酯混合标准品气相色谱图，由图可见35种脂肪酸甲酯标准品分离情况较好（脂肪酸甲酯准标准品按照其出峰时间依次编号）。各脂肪酸甲酯标准品及保留时间见表1。
图2为树莓果油脂肪酸甲酯化产物的气相色谱图。通过与脂肪酸甲酯标准品保留时间的对比，可以确定树莓果油中主要含有4种脂肪酸，包括1种饱和脂肪酸3种不饱和脂肪酸。利用峰面积归一化法计算各脂肪酸的百分含量，其中饱和脂肪酸棕榈酸占脂肪酸总量的0.66%，3种不饱和脂肪酸油酸、亚油酸和a-亚麻酸分别占脂肪酸总量的17.33%，49.00%和
33.01%。树莓果油中的不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸的99.34%。
3.2树莓果油的抗氧化作用
3.2.1树莓果油对ABTS自由基的清除作用
如图3所示，树莓果油对ABTS自由基具有很强的清除作用，在浓度为0.045-3 mg/m L，其对ABTS自由基的清除作用随浓度的增加而不断增强；当浓度达到6 mg/m L时，其对ABTS自由基的清除作用趋于稳定。12 mg/m L的树莓果油对ABTS自由基的清除率高达96.49%，相同浓度下的阳性对照(VC)对ABTS自由基的清除率为99.89%。
3.2.2树莓果油对DPPH自由基的清除作用
图4为树莓果油对DPPH自由基的清除作用。可以看出，树莓果油对DPPH自由基亦有很强的清除作用，其清除作用随浓度的增加而持续增加。12 mg/mL的树莓果油对DPPH自由基的清除率高达93.53%，相同浓度下的阳性对照( VC)对DPPH自由基的清除率为97.67%。
3.2.3树莓果油对超氧阴离子的清除作用
由图5可见，树莓果油对超氧阴离子有明显的清除作用，在浓度为0.09～0.375μ g/m L时，其对超氧阴离子的清除作用随浓度增加而急剧增强；当浓度超过0.375 μg/m L后其对超氧阴离子的清除作用随浓度增加而缓慢增强。12 μg/m L的树莓果油对超氧阴离子的清除率为49.89%，相同浓度下的阳性对照(VC)对超氧阴离子的清除率为99.85%。
3.2.4树莓果油对羟自由基的清除作用
图6为树莓果油对羟自由基的清除作用。可见，树莓果油对羟自由基有一定的清除作用，且其清除作用随浓度的增加而不断增强。12 mg/m L的树莓果油对羟自由基的清除率为37.73%，相同浓度下的阳性对照( VC)对羟自由基的清除率为98.50%。
4结论
不饱和脂肪酸是人体不能合成而又必需的脂肪酸，必需从膳食中获取，具有极为重要的生理功能。亚油酸是人体合成前列腺素的主要物质，具有防止血栓形成和扩张血管的作用，其还可以预防动脉粥样硬化、高血压和高血脂等疾病。亚麻酸是构成人体组织细胞的主要成分，可转化为人体必需的二十二碳六烯酸( DHA)和二十碳五烯酸(EPA)，具有提高免疫力、抗疲劳、补脑健脑、预防视力减退、预防动脉粥样硬化等作用。研究利用气相色谱分析了树莓果油的脂肪酸组成，发现树莓果油中含有大量的的不饱和脂肪酸，其含量占总脂肪酸的99.34%。其中，油酸、亚油酸和a-亚麻酸分别占脂肪酸总量的17.33%，49.00%和33.01%。与沙棘果油相比，树莓果油中的不饱和脂肪酸含量更高。其中，亚油酸含量为沙棘果油的10.81倍（沙棘果油的亚油酸含量为4.53%），亚麻酸含量是沙棘果油的19.5倍（沙棘果油的亚麻酸含量为1.69%）。
自由基的化学性质非常活泼，它能与生物体内的诸多物质大分子发生作用，进而造成细胞结构与功能的破坏。自由基在多种病理过程中扮演着重要角色，如癌症、糖尿病、动脉粥样硬化、组织损伤、衰老等。试验发现，树莓果油对ABTS自由基、DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基均具有良好的清除作用。其中，对ABTS和DPPH自由基的清除作用尤其强，几乎与VC的作用相当。说明树莓果油具有极强的抗氧化活性。
综上所述，树莓果油可以作为优质食用油，具有极大地开发价值和应用前景。
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