鸡油茵中多酚含量测定的研究

  郭豫梅
  陕西理工学院化学与环境科学学院(汉中723001)
摘要利用溶剂浸提法对鸡油菌中的多酚物质进行提取，采用福林法测定鸡油茵中多酚含量。结果表明，当福林试剂与10% Na2CO3体积比为1：2，福林试剂体积为4mL，反应温度为25℃，反应时间为120 min时，鸡油菌多酚的含量为14.04 mg/g，回收率为99.87%，RSD为0.494%，有较好的精密度和准确度。
关键词鸡油菌；多酚；福林法
     鸡油菌（Cantharelles cibarius）别名黄丝菌、杏菌，是一种外生菌根真菌，属真菌界、担子菌门、同担子菌纲、鸡油菌科和鸡油菌属。鸡油菌富含胡萝卜素、VA、VC和钙、铁、磷等多种矿质元素，其性平、味甘，具有清肝、明目、利肺、和胃、益肠、减肥、美容和抗衰老等功效。经常食用该菌可以防治因缺乏VA所引起的皮肤干燥症、角膜软化症、视力失常、眼炎、夜盲症，还可以预防某些呼吸道和消化道感染的疾病。此外，鸡油菌子实体多糖对小白鼠肉瘤S-180的抑制率可达80%天然多酚类化合物广泛存在于植物中，现代科学研究表明，天然多酚类化合物具有优异的抗氧化性能和显著清除自由基能力，主要药理效应表现在延缓机体衰老、预防心血管病、抗癌、抗辐射和抗艾滋病等方面。多酚物质具有特殊的生物活性，在医疗与保健等方面有着重要的作用和利用价值。
     目前所报道的多酚的福林法测定条件各不相同。对于鸡油菌多酚的福林法测定的研究仍鲜见报道。试验以没食子酸为标准品，采用福林法测定鸡油菌中多酚的含量，为更好地开发利用鸡油菌多酚资源提供一定的理论基础。
1  材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
     鸡油菌：市售。没食子酸标准品、钨酸钠、钼酸钠、磷酸、硫酸锂、无水碳酸钠：分析纯。
     722E型可见光分光光度计：上海光谱仪器有限公司；FW177-粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；SHB-III循环水时多用真空泵：巩义仪器设备厂；电热恒温水浴锅：天津市渤海电器厂；101型电热鼓风干燥箱：北京科伟永兴仪器有限公司。
1.2试验方法
     精确称取5.000 g预处理过的鸡油菌粉末，每次用80 m L体积分数为70%乙醇于80 0C条件下回流提取2次，每次回流2h，合并提取液，过滤，减压浓缩后转入250 m L容量瓶中，定容。用比色法测定吸光度，并计算多酚的含量。
1.2.1福林试剂的配制
     在1L磨口回流装置内加入50.0 g钨酸钠、12.5 g钼酸钠、350 m L蒸馏水、25mL 85%浓磷酸及50mL37%浓盐酸，充分混匀以小火回流10 h（回流过程中，不能使液体沸腾，只能维持在缓慢冒气泡状态），加入75.0 g硫酸锂、25 m L蒸馏水和数滴溴水，然后开口继续加热至沸，维持15 min，以除去多余的溴，溶液呈金黄色，冷却后补足蒸馏水至500 m L，置于冰箱中冷藏备用，临用时稀释。
1.2.2标准曲线的配制
     精密称取干燥的没食子酸标准品0.125 0 g (99.7%)用10 m L无水乙醇溶解，蒸馏水定容至250 m L容量瓶中，其质量浓度为0.500 0 mg/m L。从上述 没食子标准溶液中分别移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0和6.0 m L到25 m L容量瓶中定容。从上述不同质量浓度的标准溶液中，移取5.0 m L到100 m L容量瓶中，分别加入50 m L蒸馏水，加入4 m L福林试剂摇匀，静置4～5 min，加入8mL 10% Na2CO3，用蒸馏水定容，置于25 ℃的恒温水浴锅中120min，显色后于765nm波长下测定吸光度，可得标准曲线，如图1所示。
     如图1所示，没食子酸在质量浓度为1～6 μg/m L内，与其吸光度呈良好的线性关系。在此范围内的线性回归方程为y=0.143 09x+0.101 2，相关系数R2=0.999 1。

1.2.3样品测定
     准确吸取10 m L样品提取液于50 m L的容量瓶中定溶，从中吸取5 m L于100 m L容量瓶中，加入50 m L蒸馏水，再加入4 m L福林试剂摇匀，静置4 —5 min，加入8mL10% Na2CO3，用蒸馏水定容，置于25 0C的恒温水浴锅中120 min，显色后于765 nm波长下测定吸光度。由标准曲线，计算得出多酚的含量C样品=280.8μg/m L。
2结果分析
2.1  福林试剂与10% Na2CO3体积比的选择
     准确吸取10 m L样品提取液于50 m L的容量瓶中定溶，从中吸取5 m L于100 m L容量瓶中，加入50 m L蒸馏水，再加入3 m L福林试剂摇匀，静置4～5 min，加入不同体积的10% Na2CO，，使福林试剂与10% Na2CO3体积比分别为3:1，2:1，1：1，1：2，1：3和1:4，
即1.0，1.5，3.0，6.0，9.0和12.0 m L的10% Na2CO3，用蒸馏水定容，置于25 0C的恒温水浴锅中120 min，显色后于765 nm波长下测定吸光度。
     图2表明，加入10% Na2CO36 m L时，吸光度最大，这说明福林试剂与10% Na2CO3体积比为1：2时显色反应恰好完全。

2.2福林试剂用量的选择
     准确吸取10 m L样品提取液于50 m L的容量瓶中定溶，从中吸取5 m L于100 m L容量瓶中，加50 m L蒸馏水，再分别加入2，3，4，5和6 m L福林试剂摇匀，静置4～5 min，加入同体积的10% Na2CO3，用蒸馏水定容，置于25 0C的恒温水浴锅中120 min，显色后于765nm波长下测定吸光度。
     由图3可见，相同条件下比色液吸光度随福林试剂用量的增大，先增大后减少，当福林试剂体积为4 m L时，吸光度最大。因此，选择福林试剂用量为4mL，10% Na2CO3用量为8 m L作为测定操作条件。

2.3反应时间的选择
   准确吸取10 m L样品提取液于50 m L的容量瓶中定溶，从中吸取5 m L于100mL容量瓶中，加入50 m L蒸馏水，再加入4 m L福林试剂摇匀，静置4～5 min，加入8 m L的10% Na2CO3，用蒸馏水定容，分别置于25 ℃的恒温水浴锅中反应30，60，90，120和180 min，显色后于765 nm波长下测定吸光度。结果见图4。

     由图4可知，随着反应时间的延长，吸光度先增大，120 min之后增加不明显，曲线变得平坦。因此，选择120 min作为鸡油菌多酚含量测定的操作条件。
2.4反应温度的选择
   准确吸取10 m L样品提取液于5 0mL的容量瓶中定溶，从中吸取5 m L于100 m L容量瓶中，加入50 m L蒸馏水，再加入4 m L福林试剂摇匀，静置4 —5 min，加入8 m L 10% Na2C03，用蒸馏水定容，分别置于10℃，25℃,30℃ ,40℃和50℃的恒温水浴锅中反应120mm，显色后于765 nm波长下测定吸光度。
   结果见图5，随着温度的改变，吸光度相差明显，低温时变化较大，随着温度的升高而升高，25 ℃时达到最大值，之后虽温度升高而降低但比低温时变化小。故试验选25℃作为测定操作条件。

2.5精密度试验
   为检验该法的精密度进行重复性试验，取样品5mL 6份，按1.2.3所述的试验方法进行平行测定。由表1可得出RSD为0.494%。

2.6加标回收试验
     为进一步确定福林法测定鸡油菌多酚含量的准确度，在0.5 m L样液中加适量标准没食子酸溶液，按1.2.3操作进行，得出多酚的含量。以加标测得的量减去原样的量，除以加标量，由表2可得出加标回收率为99.87%。

3结论
     试验采用以没食子酸为标准品，采用福林比色法测定鸡油菌多酚含量的最佳条件为：福林试剂与Na2CO3(10%)溶液的体积比1：2，福林试剂体积4 m L，反应温度25 ℃，反应时间120 min。测定方法的RSD为0.494%，平均回收率为99.87%，鸡油菌中多酚含量为14.04 mg/g。由此可见，该方法具有较高的精密度、重复性好、操作简单、灵敏度高和稳定性等优点，这也表明福林法比较适合鸡油菌多酚含量的测定。