作者：郑晓敏
噻虫嗪是新一代高效、低毒、广谱型烟碱类杀虫剂，具有良好的胃毒、触杀活性。目前，噻虫嗪的检测分析方法主要有高效液相色谱法( HPLC) [1-6]、液相色谱一质谱法( LC-MS)[7-10]、气相色谱一质谱法(GC—MS)[11]。这些检测方法存在前处理复杂、回收率偏低或者灵敏度较低等缺点，因此，建立了一种高效、实用的针对蔬菜中噻虫嗪的快速、灵敏的检测方法，对全面加强蔬菜中的噻虫嗪农药污染监测和监管，保证蔬菜产业健康发展具有重要意义。
农药残留的提取方法除了传统的萃取技术，还有震荡提取，分散固体萃取等新发展的提取技术；净化方法多采用固相萃取柱进行净化。同时以分散固相萃取为基础的QuEChERs前处理技术被广泛应用于农药残留检测。采用了改进的QuEChERs前处理技术、超声波辅助、固相萃取净化，并优化了HPLC-MS/MS检测方法，建立了一种能准确、快速电话灵敏测定蔬菜中噻虫嗪残留的检测方法，满足蔬菜相关限量标准的要求，为我国监控蔬菜中噻虫嗪农药残留提供技术支撑[12-15]。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器与设备
高效液相色谱仪，ACCELA 600 Pump：Thermo Fisher;质谱系统，Thermo TSQ QUANTUM ACCESSMAX: Thermo Fisher;空气浴振荡器，QZX—C：哈尔滨市东明医疗仪器厂；电子分析天平( 0.000 1 g)，AL104:梅特勒-托利多仪器有限公司。
1.1.2试剂和材料
乙腈（分析纯，北京化工厂），甲醇（色谱纯，德国Merk公司）；噻虫嗪农药标准溶液(100ug/m L，国家农药质量监督检验中心)；石墨化炭黑( Carb)、N-丙基乙二胺(PSA)(Agela Technologies公司)。
1.2试验方法
1.2.1样品的提取
称取蔬菜样品5.0 g于50 mL塑料离心管中，加入20 mL乙腈，5 g NaCl，涡旋振荡20 min．以4 000 r／min离心15 min，取上清液于另一只装有7 g无水硫酸钠的离心管内，涡旋震荡1 min，以4 000 r/min离心15min，待净化。
1.2.2提取液的净化
向2 mL离心管内加入Card和PSA粉末分别为20 mg和60 mg，取样品上清液1.6 mL于离心管内，3 000r/min涡旋2 min，振荡0.5 h后，以10 000 r/min离心5 min，取上清液过0.22um微孔滤膜，待测。
1.2.3色谱条件
色谱柱：Thermo C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.9 um)；柱温：室温；流速：350 uL/min；进样量：1uL。梯度洗脱条件如表1所示。
离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子源；毛细管电压：350 V；锥孔电压：3 200 V；离子源温度：200℃；蒸发温度：200 0C；鞘气：50 psi；辅助气：10 arb。检测方式：多重反应监测(SRM)如表2所示。
1.2.4色谱分析
采用自动进样器进样，将噻虫嗪农药标准品和净化过的样品注入LC/MS/MS中，在相同的色谱条件下，以保留时间定性，以样品峰面积和标准品进行比较定量。噻虫嗪农药标准品色谱图见图1。
2结果与讨论
2.1提取条件的选择
根据噻虫嗪农药的极性和相关文献的报道，用的较多的提取溶剂有乙酸乙酯、丙酮、乙腈等或者它们的混合溶剂。由于噻虫嗪极性较强且蔬菜中含水量较多，故乙酸乙酯提取杂质较多，提取溶液颜色较深，质谱的基质影响较大，回收率的精密度稍差，平均添加回收率为40.4%~65.2%；丙酮对于极性较强的农药提前效果较好，平均回收率为81.2%，但不易于水分层，且色素含量较高。乙腈具有溶解性大、穿透力强，净化简单的特点，可以有效地提取农药且干扰物少，当向提取液中加入氯化钠时，乙腈与水有明显分层，提取效果良好，且杂质干扰较少，其平均回收率在94.5%，因此试验选择乙腈作为提取溶剂[4-5]。原始的QuEChERS法去除杂质虽然快速、简单、高效、安全，特别在操作步骤少、对于复杂样品净化上表现突
出，但加入无水硫酸镁后极易结块，除水效果不佳，导致样品平行性较差，因此作者改进为加入NaCl盐析、离心分层取出上清液后，再加入无水硫酸钠，使其干燥效果提高。
2.2柱净化条件的选择
由于蔬菜基质复杂包括绿叶菜、根茎菜等，对于LC/M S/MS来说，上述提取液不能满足检测要求，需进一步净化。通过比较中性氧化铝、Florisil固相萃取柱、Carb/NH2固相萃取柱进行净化和回收率试验，由于样品在浓缩过程中经常爆沸使得回收率在70.1%～82.5%；原始的QuEChERS法仅使用PSA净化，虽然其去除有机酸效果较好，但去除色素、甾醇和
维生素效果一般，由于样品含有部分色素，对LC/MS／MS产生较严重的基质效应，而Carb对色素杂质等效果较好，故试验选用Carb+PSA粉末进行样品净化。净化吸附剂的用量是影响净化效果和回收率的决定因素，使用量小时，净化效果不明显，有杂质干扰，使用量大时净化效果明显但影响回收率。往同一浓度的噻虫嗪标准品溶液中单用PSA和分别加入相同量的PSA与不同量Carb，经涡旋震荡1 min，静置1 min，取上清液过0.22I_Lm有机滤膜，LC-MS/MS测定，每组6个平行样，得到回收率数据为PSA分别加入50，60，70以及80 mg，回收率为92.3%—97.4%，故PSA对噻虫嗪吸附没有影响，故选择60 mg PSA。当加入60 mg PSA以及分别加入20，30，40和50 mg Carb时，回收率分别为84.5 %，94.7%，70.2%以及67.6%。Carb对色素等杂质净化效果好，但对噻虫嗪有较强的吸附作用，PSA对噻虫嗪吸附影响较小。通过试验数据确定了净化蔬菜样品的乙腈提取液，PSA用量为60 mg，Carb用量为20 mg。
2.3线性与检出限
将100.0 ug/mL的噻虫嗪标准溶液用乙腈：水=2：8（V:V稀释配得50.0，10.0，5.0，1.0和0.5 ng/mL系列标准溶液，在上述液相条件下进行测定，以噻虫嗪标准溶液浓度与面积作标准曲线。标样线性方程为：Y=86 778X+36 892，相关系数为：R=0.999 9；其中y为噻虫嗪峰面积，X为标准溶液浓度。
2.4回收率和精密度
选用番茄、甘蓝、芹菜3种蔬菜样品若干份（已测得此样的噻虫嗪农药残留本底值为空白），分别加入一定量的标准品溶液，3个添加水平分别为0.01，0.05和0.10 mg/kg，每个添加水平做6个平行，充分混匀后按“2.2”项操作进行测定，求平均回收率及相对标准偏差( RSD)。具体数据见表3所示，样品空白及加标样品谱图见图2和图3。
3结论
试验建立了一种快速检测蔬菜中噻虫嗪农药残留的LC/MS／MS的检测技术，该方法回收率在89.9%~102.4%之间，相对标准偏差在1.88%~3.75%之间，方法检出限为0.3u g/kg定量限为1ug/kg，具有灵敏度高、分离效果好、重复性强等特点，适用于短时间内大批量测定蔬菜中噻虫嗪。
4摘要
利用液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)建立了蔬菜中噻虫嗪农药测定的方法。方法试样中噻虫嗪农药残留在超声波振荡条件下用乙腈提取，经石墨化炭黑(Carb)和N-丙基乙二胺(PSA)粉末净化，经液相色谱质谱联用仪检。噻虫嗪农药残留的色谱图分离效果良好，在0.5~50.0 ng/mL质量浓度内呈现良好线性关系, R=0.999 9，方法的检出限为0.3 ug/kg，回收率为89.9%~102.4%，相对标准偏差为1.8%~3.75%。该方法简单、快速、灵敏、净化效果好、回收率高，适合蔬菜中噻虫嗪农药残留的检测和安全监控。
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