测定草莓、蓝莓和黑莓中维生素含量C的新方法

    作者：郑晓敏

    维生素C又称抗坏血酸，是一种维持人体正常生理代谢但人体自身又不能合成的一类重要化合物，广泛存在于各种水果中[10]。它对人体具有重要的生理功能，如果人体缺乏维生素C会引起坏血病[11]。因此水果中维生素C含量的测定方法具有重要的研究价值。维生素C含量的测定方法一般常用化学滴定法、比色法、紫外分光光度法、荧光法和电位测定法等[12]，而这些方法一般所需试剂较多，操作繁琐，准确定和精密度难以保证。近年来，由于高效液相色谱法具有效率高、速度快、稳定性强、准确性好等特点[13]，水果中维生素C含量的测定高效液相色谱已开始应用，如猕猴桃[14] 、蜜柚[15] 、菠萝[16] 、芒果等[17]，这些研究者都建立了一种较好的高效液相色谱测定水果中维生素C含量的方法。然而，草莓、蓝莓以及黑莓等浆果类水果的维生素C含量却鲜有报道用高效液相色谱方法测定。试验选择草莓、蓝莓和黑莓为原料，通过液相色谱进行分离优化，建立了一种简便、快捷、准确、稳定的维生素C含量的测定方法。

1  材料与方法

1.1材料与试剂

    市售草莓、蓝莓和黑莓，南京市溧水县傅家边农业科技观光园；维生素C标准对照品（含量99.7 010）、草酸（分析纯），南京化学试剂有限公司；无水甲醇（色谱纯），南京化学试剂有限公司。

1.2仪器与设备

    高效液相色谱仪LC-20AT配二极管阵列检测器：日本岛津公司；Hypers11-C18色谱柱(5 um，150 mm×416 mm)：中国科学院兰州化学物理研究所；紫外检测仪：天津天光光学仪器有限公司；KQ5200B型超声波清洗器：广东固特超声股份有限公司；AE系列电子天平：梅特勒托利多仪器上海有限公司；TD型台式离心机：上海安亭科学仪器厂；SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司。

1.3方法

1.3.1样品处理

    新鲜草莓、蓝莓和黑莓用二次蒸馏水洗净，切开后放置于组织匀浆机中匀浆，布氏漏斗过滤，取2.5mL滤液于25 mL棕色容量瓶中，用0.1%草酸溶液定容。超声振荡10 min，2 000 r/min离心5 min后取上清液，分析前用0.45 um滤膜过滤。

1.3.2标准曲线的制备

    准确称取维生素C标准品50 mg，用0.1%草酸溶液溶解并定容50 mL棕色容量瓶中，摇匀即得1 mg/mL的标准储备液。分别准确移取维生素C标准储备液0，0.5，1，1.5，2和2.5 mL，用0.1%草酸溶液定容至25 mL，得到0，20，40，60，80和100 mg/L维生素C标准溶液，使用前用0.45u m滤膜过滤。

1.3.3色谱条件

    色谱柱：Hypersil-C18；流动相：0.1%草酸溶液；进样量：10 uL;流速：1.0 mL/min；检测波长：246 nm；柱温：25℃；灵敏度：0.1 AUFS。

2结果与分析

2.1  维生素C波长的选择

    如图1所示，通过在紫外区进行扫描，发现维生素C在246 nm有最大吸收，故试验选择246 nm作为维生素C的检测波长。

2.2标准曲线的绘制

    根据1.3.3色谱条件进样测定，以维生素C溶液浓度为横坐标，以峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为Y=10 765X-14 442，相关系数R2=0.996 8。结果表明，峰面积与溶液质量浓度呈良好线性关系，见图2。

2.3维生素C含量的测定

    同一种草莓，蓝莓和黑莓样品在相同的试验条件下平行测定6次。按1.3.3的色谱条件分别测定维生素C标准样品、草莓、蓝莓和黑莓的色谱图见图3~图6。草莓、蓝莓和黑莓样品中维生素C含量测定结果见表1。

2.4精密度试验

    将处理过的草莓，蓝莓和黑莓样品经0.45u m滤膜过滤，按1.3.3的色谱条件平行测定6次，测定结果见表2。

    由表2可以看出，同一草莓，蓝莓和黑莓样品在相同试验条件下测定6次，测得维生素C含量分别为68.84, 19.44和34.10 mg/100 g。从表2还可以看出，精密度试验相对标准偏差在3%以内，说明方法重复性好。该方法测定维生素C时间在6 min以内，具有快速而又灵敏等优点。

    分别准确移取2 mL经0.45u m滤膜过滤的草莓，蓝莓，黑莓溶液，向样品中依次加入质量浓度为100 mg/L的维生素C标准溶液1，2，3，4和5 mL，测定其回收率，草莓、蓝莓和黑莓的结果分别见表3。

    由表3可知，草莓样品的回收率在95.53%~108.90%之间，蓝莓样品的回收率在94.00%～104.44%之间，而黑莓的回收率在95.32%～104.10%之间，说明本方法测定结果具有准确而又可靠等优点。

3结论

在流动相0.1%草酸溶液，上样量10uL，流速1.0 mL/min，检测波长246 nm，柱温25℃的色谱条件下，高效液相色谱测得草莓、蓝莓和黑莓中维生素C含量分别为68.72，19.86和34.66 mg/100 g，三种水果中维生素C含量依次为草莓>黑莓>蓝莓。草莓、蓝莓和黑莓色谱测定的标准偏差分别为1.03，0.64和0.96，相对标准偏差分别为1.49%，3.29%和2.83%，回收率分别为95.53%—108.90%，94.00%～104.44%和95.32%—104.10%。说明高效液相色谱测定方法准确可靠，也可用于其它水果中维生素C含量的测定。

4摘要

采用高效液相色谱法(HPLC)测定草莓、蓝莓和黑莓三种水果中的维生素C(CV)含量。色谱条件为0.1%的草酸溶液为流动相，Hypersil-C18色谱柱，检测波长为246 nm，流速为1.0 mL/min，柱温25℃。结果表明：维生素C在质量浓度为0~100 mg/L范围内有良好线性关系，线性回归方程为Y=10 765X-14 442, R2=0.996 8。高效液相色谱测得每百克草莓、蓝莓和黑莓中维生素c含量分别为68.84, 19.44和34.10 mg。草莓、蓝莓、黑莓样品的回收率在95.53%~108.90%, 94.00%~104.44%和95.32%~104.10%之间，高效液相色谱方法准确可靠，可用于其它水果维生素C含量的分析测定。