作者：张毅
维生素C即抗坏血酸，是一种水溶性维生素，具有抗坏血病、抗感冒和提高免疫力的功能。还能促进体内胶原蛋白和黏多糖的合成，增加机体抵抗力，对人体健康有着重要的意义。人体因缺乏古洛糖内酯氧化酶而不能合成自身所需的维生素C，故必须从食物中获取。
随着维生素C在食品工业中广泛应用，食品中维生素C含量测定已成为人们关注的一个重要问题，同时引起不少研究者重视。目前维生素C测定方法主要有滴定法、分光光度法、荧光分光光度法、电极法、薄层色谱法、高效液相色谱法等，从国内维生素C含量测定方法使用现状分析，分光光度法及荧光分光光度法仍然是维生素C含量测定的主流，如测定维生素C含量的国家标准方法中，多为分光光度法及荧光法，但这2种方法测定耗时长，试验试剂安全隐患大，同时操作过程复杂、高效液相色谱法因为操作简便、灵敏、可靠等特点得到较快的发展。但目前国标法仅SN/T 0744-1999“出口饮料中维生素C和咖啡因检验方法”中采用高效液相色谱法，且针对饮料样品。超高效液相色谱是在普通高效液相色谱基础上发展起来的新一代高效液相色谱仪，它对于分离和测定有机物质有更多的优越性，试验尝试用超高效液相色谱测定明胶糖果中的维生素C，获得较好的效果，不仅分析时间更短、峰型更窄，灵敏度高，定量更精准，而且样品和溶剂用量少，为明胶糖果中维生素C的测定开辟一条新的途径。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器与设备
UPLC: Waters H-Class；TUV紫外检测器；Empower3软件：Waters；超声波仪：安谱；超纯水机：ELGA。
1.1.2试剂与标准品
草酸：AR；磷酸二氢钾：AR；磷酸：AR；甲醇：HPLC；磷酸二氢钾溶液：6.8 g/L，pH 2.3；维生素C标准品：≥99.9%，Dr.E。
1.1.3样品
明胶糖果。
1.2方法
1.2.1 维生素C标准储备液制备
称取维生素C标准品(≥99.9%) 0.100 0 g，用超纯水定容到100 mL，摇匀，配置成1.0 mg/mL的标准储备液．4℃避光保存，可放置l周。
将上述标准储备液用超纯水稀释成维生素C含量为1，5，10，20，50和100μg/mL标准使用液，现用现配。
1.2.2样品的处理
将样品于避光条件下，用剪刀剪成尽量细小的颗粒。称取1.0 g精确至0.000 1 g剪碎的样品于约60 mL磷酸二氢钾溶液中超声提取15 min，加5 mL乙酸锌溶液和5 mL亚铁氰化钾溶液，用磷酸二氢钾溶液定容至100 mL棕色容量瓶中。静置20 min，取上清液10 mL，用磷酸二氢钾溶液稀释至50 mL，过0.22 1m滤膜，待测。
1.2.3色谱条件
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3( 2.1mm×50 mm×1.8 μm)；流动相：V(6.8 g/L磷酸二氢钾溶液( 6.8 g/L，pH 2.3))：V（甲醇）=99：1，流速0.3 mL/min，进样量10 μL，柱温30℃，波长为266 nm。
2结果与讨论
2.1试验条件的选择
2.1.1检测波长的选择
对维生素C标准溶液用二极管阵列检测器在190—400 nm进行全波长紫外扫描，结果表明维生素C的最大吸收波长为266 nm，故选用266 nm作为试验的测定波长。
2.1.2流动相的选择
试验分别考察3种不同的流动相进行试验，1%草酸溶液一甲醇、1%磷酸溶液一甲醇、6.8 g/L磷酸二氢钾溶液一甲醇。结果表明，使用6.8 g/L磷酸二氢钾溶液一甲醇时，基线最平稳，干扰峰相对较少，故最终选择其作为流动相。试验中还比较了流动相中6.8 g/L磷酸二氢钾溶液一甲醇的pH、比例等因素对分离效果的影响，结果表明：V(6.8 g/L磷酸二氢钾溶液(pH2.3))：V（甲醇）=99：1时，待测物质色谱峰峰形好且分离度高，可以准确测定其峰面积，进行定量分析。结果见图1~图3。
2.2线性范围
分别取标准使用液，用HPLC分别测其峰面积，峰面积及线性方程、相关系数的结果见表1。
2.3回收率试验
取明胶糖果，分别在3个添加水平下的回收率结果见表2（样品回收率表），3个水平下的平均回收率在87.9%—99.9%之间，RSD≤6.29%，能满足定量检测的要求。
2.4精密度试验
准确称取明胶糖果样品1.0 g（精确至0.000 1 g）依1.2.2处理后，平行6次测定其峰面积，保留时间基本不变。RSD分别为：RSD（tR）=0.05%，RSD (A)=6.25%。
2.5检出限
吸取5 hg/mL标准工作液10 μL重复进样10次测定，以3倍峰峰信噪比计算，检出限为5 mg/kg。
3结论
使用超高效液相分离系统，ACQUITY UPLC HSST3（2.1 mm×50 mm×1.8 μm）色谱柱，甲醇一磷酸二氢钾溶液为流动相，紫外检测器，可测定明胶糖果中的维生素C含量，该法线性范围宽、相关性好、分析时间更短、峰型更窄，灵敏度高，定量更精准，能更好的满足该类产品中维生素C含量的测定。
维生素C极其不稳定，在生产加工、储存运输和销售过程中易分解，监控此类产品的维生素C含量就显得尤为重要。该方法高效快速、样品和溶剂用量少，克服了其他方法过于复杂、耗时的缺点，可以作为明胶糖果中维生素C的检测新方法。
4摘要
建立超高效液相色谱法测定明胶糖果中维生素C含量的方法。采用超高效液相分离系统，超声波萃取法，选用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 mm×50 mm×1.8 μm)色谱柱，甲醇一磷酸二氢钾溶液为流动相，紫外检测器，波长为266 nm，峰面积外标法定量。维生素C在0.5～100 μg/mL质量浓度范围内，其质量浓度和峰面积有良好的线性关系，相关系数R=0.999 91。加标平均回收率在87.9%-99.9%之间，RSD≤6.29% (n=6)。该方法前处理简单，陈清艳
线性范围宽、分析时间短、峰型更窄，灵敏度高，定量更精准。该方法适用于明胶糖果中维生素C的测定。
